全长基因的克隆

新基因全长cDNA序列、全长DNA序列的获得常常是分子生物学工作者面临的难题。本文就克隆全长基因的各种技术如文库筛选法、各种PCR技术及新发展起来的电子克隆法等方法作一简单综述。     

Strategies for the design of inhibitors of aldose reductase, an enzyme showing pronounced induced-fit adaptations

Aldose reductase is involved in the polyol pathway, catalyzing the reduction of glucose to sorbitol. However, due to pronounced binding site adaptations, the enzyme can operate on a broad palette of structurally diverse substrates ranging from small aliphatic and aromatic aldehydes up to steroid-type ligands. A comparative analysis of the presently accessible crystal structures of aldose reductase complexes reveals four binding-competent protein conformations. Additional relevant conformers are detected through molecular dynamics simulations. They indicate an equilibrium of several conformers which is shifted towards the binding-competent geometries upon ligand binding. Such a manifold system with several alternative binding site conformers requires some tailored concepts in virtual screening. We followed two strategies, both successfully suggesting new micromolar inhibitors. In a first attempt, we concentrated on one preferred conformer and performed a virtual screening, assuming that the binding pocket of aldose reductase adopts only this conformation. In a second approach, we followed a ligand superpositioning method. Ligands were extracted in their bound conformations from three different crystal structures, all accommodating the ligands with different active site conformations. After merging these ligands into one supermolecule, mutual alignments were computed, taking candidate ligands from a screening database. The latter strategy also retrieved several structurally new inhibitors of micromolar potency.     

植物基因的克隆与转化研究进展

综述了近２０ａ来植物基因工程、特别是ＤＮＡ重组技术和基因遗传转化技术的发展历程,比较了各种分子克隆和转化方法的优劣,将有助于广大青年学者了解并掌握现代分子生物学的最新动态     

有限稀释法筛选重组AcNPV病毒

有限稀释法筛选重组ＡｃＮＰＶ病毒钟劲胡美浩１）（北京大学生命科学学院,北京,１００８７１）关键词重组病毒;梯度稀释;筛选;测活中图分类号Ｑ３３２０引言昆虫杆状病毒表达系统是一高效表达外源基因的表达系统。用于基因工程表达外源基因的ＡｃＮＰＶ（ａｕｔｏｇ...     

核酸的分子静电势（Ⅱ）──阳离子屏蔽对B－DNA静电势的影响

本文讨论了Ｂ－ＤＮＡ双螺旋中磷酸根受Ｎａ、ＣＨ３ＮＨ３、Ｍｇ２＋等阳离子屏蔽时，对其分子防电势所产生的影响．将这些因离于屏蔽Ｂ－ＤＮＡ而引起的嘧啶、嘌呤碱基的亲电位置上势极小值的影响进行了比较．通过与未受屏蔽的情况的对比，发现阳离子的屏蔽可影响势极小值．     

L-谷氨酸氧化酶高产菌株的快速筛选及诱变育种

用谷氨酸氧化酶测试液浸湿白卷纸置于菌落上,根据白卷纸上显示红色快慢、深浅,就能大致测得该菌落菌株产酶能力高低。该法可靠性大、工作量小、操作简便,显示结果快。利用该法,配合亚硝酸诱变,在短暂三个月内,将L-谷氨酸氧化酶产生菌株产酶能力提高了约25倍。     

抗生素筛选模型的建立

为节省筛选抗生素的工作量，减少重复筛选率，本实验以常规筛选模型中的指示菌为出发株，经物理化学诱变，筛选出七支突变株，它们对临床上最常用的β内酰胺类、四环素类、氨基糖醇类，大环内酯类和多烯大环内酯类抗生素敏感性显著不同，可构成一抗生素筛选模型。经检验证明通过这一模型能初步判别微生物所产抗生素的类群。     

基于改进K-Means++分时电量聚类与行业用电行为分析

由于能源互联网中分时电量分布不仅为分时电价的制定提供依据还代表着用户的用电意识,提出改进K-Means++的聚类算法与典型用户筛选模型对分时电量进行挖掘。首先对K-Means++进行改进,利用模拟退火算法(simulated annealing, SA)与中位数阈值分割自动确定聚类初始质心与聚类数,弗雷歇与欧式距离的加权复合作为相似性的度量,权值由信息熵与层次分析法(analytic hierarchy process, AHP)确定。然后对分时电量进行聚类,从每簇聚类结果中依据典型用户筛选模型筛选典型用户,得到3种用电类型,最后从主要用电类型与用电类型转变的角度对行业用电行为分析,得到不同行业相同的用电行为。有助于供电侧初步掌控区域性行业用电群体的用电特征,为精细有序的用电管理做准备。     

透水混凝土铺装基层三种骨料对典型径流污染物吸附效果比较

为提高透水混凝土铺装基层对雨水径流污染物的削减作用,通过优选骨料的方法对透水混凝土铺装基层进行功能强化研究,采用静态吸附等温试验对三种骨料开展了试验。研究表明,采用沸石骨料对雨水径流污染物削减效果最好,沸石对径流主要污染物COD、TP、TN、Cu的理论饱和吸附量分别为8.612、1.848、3.932、7.032mg/g。沸石和陶粒相较于砾石对径流污染物COD、TP、Cu的吸附能力分别提高了51%和14%、61%和34%、87%和58%,沸石对于TN的吸附远高于陶粒和砾石,所以,对骨料进行优选后可以提高基层的除污能力,为透水混凝土铺装的扩大应用提供创新方法,同时为海绵城市的建设提供技术支持。